Cafeïne, een alkaloïde uit de groep van de xanthinederivaten, kan met behulp van HPLC nauwkeurig worden bepaald. De detectie geschiedt met UV. Het analysemateriaal is na ontgassen en verdunnen geschikt voor HPLC-analyse. Bij deze bepaling wordt zowel gebruik gemaakt van de interne standaardmethode (met theofylline) als van de standaard additiemethode.

Water: gedestilleerd

Cafeïne standaardoplossing (50 mg/l)

Theofylline standaardoplossing (150 mg/l)

Los 75 mg theofylline op in 500 ml gedestilleerd water (zelf maken).

Eluens

Water/isopropanol/ijsazijn (895:100:5)

 

Cola van een willekeurig merk.

Stel de apparatuur in volgens de handleiding.

a. Monstervoorbereiding

Verwijder het koolzuur door ultrasoon te trillen. Verdun 100 ml cola tot 250 ml.

 

b. Bereiding van de meetoplossingen (in duplo!)

Pipetteer in 4 maatkolven van 100 ml telkens 25 ml van de verdunde cola en daarna 0,0, 10,0, 20,0 resp. 25,0 ml standaardoplossing van cafeïne.

Pipetteer dan in elke maatkolf 5 ml interne standaard, vul de maatkolven aan tot de maatstreep en homogeniseer.

c. Meting

Meet de oplossingen volgens de handleiding behorend bij de HPLC-apparatuur.

 

Afhankelijk van de gebruikte HPLC-apparatuur moeten de volgende bewerkingen worden uitgevoerd.

INTEGRATOR

Ga na welke piek bij cafeïne en welke bij theofylline hoort. Noteer de oppervlaktes van deze pieken in het labjournaal en bereken de verhouding tussen de oppervlaktes van cafeïne en theofylline. Maak op mm-papier ijklijnen waarin de berekende verhouding is uitgezet als functie van de concentratie cafeïne.

Bepaal door extrapolatie de concentratie cafeïne in de monsteroplossing en bereken vervolgens de concentratie cafeïne in het onverdunde monster.

RECORDER

Ga na welke piek bij cafeïne en welke bij theofylline hoort. Meet de hoogte en de breedte op halve hoogte van iedere piek. Verwerk deze gegevens in het labjournaal en bereken de oppervlaktes van de pieken door hoogte en breedte op halve hoogte met elkaar te vermenigvuldigen. Ga verder zoals beschreven staat bij INTEGRATOR.